如何设计crisper-dcas9系统的gRNA，具体步骤是什么？ - 知乎
tracrRNA（在CRISPR-Cas9编辑技术中被优化并命名为gRNA scaffold），它负责与Cas9结合，与重复序列具有同源性。 crRNA为引导序列，约20个碱基，具有特异性。 其中，crRNA和tracrRNA通过局部碱基配对组合并与Cas9结合后，引导Cas9识别切割目标DNA序列 (图1)。
CRISPR/Cas9指南 - 简书
2017年4月10日 · CRISPR包括两个部分：一个向导RNA(gRNA)和一个非特异性CRISPR结合核酸内切酶(CRISPR-associated endonumclease即Cas9)。向导RNA是一个短的合成RNA,由一段结合Cas9必需的scaffold序列和特定的约20nt的空载(spacer)或靶向(targeting)序列（靶位点）组成，其中靶向序列决定了用于修饰的 ...
Step 4: This 455bp fragment bears all components necessary for gRNA expression, namely: U6 promoter + target sequence + guide RNA scaffold + termination signal. Synthesize this as a gBlock from IDT (http://www.idtdna.com/pages/products/genes/gblocks-gene-fragments)
CRISPR/Cas9及sgRNA设计基本原则 - 纽普生物
2024年8月13日 · 当dCas9连上转录激活子（如VP64、p65和HSF1），通过gRNA引导dCas9到目标基因的启动子或增强子区域，来激活基因的转录。 这些激活因子通过吸引转录机器（如RNA聚合酶和其他转录因子）增加目标基因的转录水平。
CRISPR-Cas9 sgRNA设计和载体构建 - 王进的个人网站
2020年5月29日 · 在LentiCRISPRv2载体中有两个BsmBI酶切位点，两个位点之间的片段为1885bp，酶切连接后sgRNA正好在U6启动子下游，连接后的sgRNA下游就是gRNA scaffold序列，与sgRNA一起转录出来发挥gRNA的引导功能。
CRISPR Guide - Addgene
The gRNA is a short synthetic RNA composed of a scaffold sequence necessary for Cas-binding and a user-defined ∼20-nucleotide spacer that defines the genomic target to be modified. You can therefore change the genomic target of the Cas enzyme by simply changing the target sequence present in the gRNA.
双靶点CRISPR载体构建 (哺乳动物细胞) - 知乎 - 知乎专栏
红色G是根据addgene部分构建好的质粒经验，在sgRNA的20个碱基之前，建议保留sgRNA插入红色G和gRNA scaffold之间。 插入序列中引入引物RVP3和RVP4作为测序引物，是荧光素酶报告基因质粒的常用引物，为防止和Cas9骨架质粒引物重复导致无法测序。
CRISPR: Guide to gRNA design - SnapGene
The gRNA: The role of the gRNA is to target Cas9 cleavage. Depending on the specifics of your experiment, you may want to use an online gRNA design tool that will search a relatively large sequence for candidate gRNAs and score them. If however, your experiment is more constrained to a small genomic target, you can design your gRNA using SnapGene.
CRISPR-Cas9 全程实操教程：从 gRNA 设计到挑单克隆全程指导
2019年10月12日 · CRISPR RNA (crRNA) 与转录激活 crRNA (Trans-activating crRNA， tracrRNA) 退火形成的复合物能特异性识别与其互补的 基因组 序列，引导 Cas9 核酸内切酶在目的片段生成 DNA 双链断裂，如下图所示。 通过基因工程手段对 crRNA 和 tracrRNA 进行改造，将其连接在一起得到 sgRNA (single guide RNA)。 通过将表达 sgRNA 的原件与表达 Cas9 的原件相连接，得到可以同时表达两者的质粒，将其转染细胞，便能够对目的基因进行基因操作，在 …
gRNA design steps: Target gene analysis, find canonical gRNA sequences, off-target analysis, location analysis, and gRNA delivery. Modified Cas9 nucleases, including Cas9n and FokI-dCas9, improve targeting specificity. Paired gRNAs are needed. GenScript offers free gRNA online design tool, featuring off-target risk ranking.