2024年3月7日 · 设计的sgRNA与你的目标序列显然要有同源性啊,并且两个切割位点之间的距离不宜过长。 还有另一种思路:利用微同源末端连接(MMEJ),MMEJ利用DSB两侧5-25bp的区 …
其中,sgRNA能够识别靶DNA序列中保守的前间区序列邻近基序(Protospacer Adjacent Motifs,PAM),通过与Cas9蛋白结合,引导Cas9核酸内切酶定点切割靶向DNA。但如 …
sgRNA体外转录活性检测失败可能的原因有什么? 我sgRNA体外转录的条带是很亮的一块,然后用没纯化的sgRNA直接进行体外切割活性检测,不仅切不出来那条带,只在最下面有个拖带, …
2023年2月13日 · 图5. sgRNA在CCTop在线网页的脱靶分析. sgRNA的设计,你学废了吗?不过这仅仅是基因编辑方案设计中的一环,基因编辑方案还需要考虑目的基因转录本分析、转染方法 …
2021年11月24日 · SgRNA是 CRISPR基因敲除敲入系统中重要的组成部分, SgRNA通过与靶标序列互补配对引导Cas9蛋白至靶标序列并进行切割。 好的sgRNA靶点可以提高效率的同时降低 …
在公司可以直接合成整个sgRNA,也可以分两段合成再anneal到一起,不同的sgRNA还可以share tracr RNA。 如果要合成DNA,再自己通过体外转录合成RNA的话,我做过合称ssDNA,再扩 …
求助各位大牛,小弟想要做crispr,目前只有我想敲除的基因序列,我该去哪里设计sgrna呢?
2021年9月17日 · rna干扰最初是怎样发现的呢?我们也简单回顾下: 早在1984年人们就发现反义rna能够抑制基因的表达,但后来人们发现发现双链rna在抑制基因表达方面实际上比单链rna …
我目前是在细胞里构建ko,用crisper造移码突变,然后挑单克隆,对sgrna附近400bp进行pcr后送测序。
(3)慢病毒包装sgRNA和dCas9-转录因子; (4)sgRNA和dCas9-转录因子病毒液共感染目的细胞; (4)感染48-72小时后,加入对应的抗性筛选培养基,同时设置未转染的阴性对照,连 …